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非放射性標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交
更新時(shí)間:2015-07-22   點(diǎn)擊次數(shù):1479次

    如果用不同的標(biāo)記物標(biāo)記不同的核酸探針,只要互相不影響各自的雜交反應(yīng),檢測(cè)系統(tǒng)也不相互干擾,雜交信號(hào)易于分辨,原則上均能用于雙重或多重標(biāo)記原位雜交。應(yīng)用非放射性標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交。可克服放射性核素標(biāo)記探針的分辨率低、時(shí)間長(zhǎng)以及放射性污染等缺點(diǎn)。

    1.應(yīng)用生物素標(biāo)記探針的雙重標(biāo)記原位雜交  應(yīng)用生物素分別標(biāo)記的兩種探針進(jìn)行雙重標(biāo)記原位雜交時(shí),雜交反應(yīng)可用含兩種標(biāo)記探針的雜交液一次進(jìn)行。因?yàn)樯锼貥?biāo)記探針可用辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素檢測(cè)(以3―氨基―9―乙基―卡巴唑?yàn)榈孜?,陽性反?yīng)產(chǎn)物為紅色),而標(biāo)記的探針用堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體來檢測(cè)(反應(yīng)產(chǎn)物為藍(lán)色),兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)互相無干擾,所以,標(biāo)記的親和素抗體也可混合在一起一次孵育。但兩種酶的呈色反應(yīng)需要的pH條件相同,故呈色反應(yīng)需分先后兩次進(jìn)行。

    2.雙重?zé)晒鈽?biāo)記原位雜交  利用具有不同顏色的熒光素分別標(biāo)記不同的核酸探針,可檢測(cè)同一組織或細(xì)胞內(nèi)兩種不同的靶核酸。用不同的熒光素作標(biāo)記物進(jìn)行雙重標(biāo)記原位雜交,有直接法和間接法兩種。直接法將具有不同顏色的兩種熒光素分別標(biāo)記兩種不同的核酸探針,用其做原位雜交,雜交信號(hào)能在熒光顯微鏡下通過選擇不同的激發(fā)濾片而直接觀察。此法操作簡(jiǎn)便,但敏感性不高。間接法用生物素分別標(biāo)記兩種不同的核酸探針,然后用不同熒光素標(biāo)記的親和素(或抗生物素抗體)抗體來檢測(cè)雜交體。間接法比直接法敏感性更高。

 

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